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              血細胞分析儀的發展和工作原理(一)"
              DIAGRAY  |  2019.08.22 738


              血細胞分析儀的發展和工作原理(一)

              一、發展歷程

              50年代初庫爾特先******明了粒子計數技術的專利,制造了******臺血細胞分析儀并應用于臨床以來,血細胞分析儀的發展已有50年的歷史。血細胞分析儀實質上是指對一定體積內血細胞數量及異質性進行分析的儀器。***初的血細胞計數儀(Cell Counter)僅能計數紅細胞(RED)和白細胞(WBC),后來又有了血紅蛋白(HBG)、血小板(PLT)、紅細胞壓積(HCT)、平均紅細胞體積(MCV)等幾個參數。而發展成為血細胞分析儀(Hematology Analyzer)后,又增加了許多分析和計算參數,如紅細胞體積分布寬度(RDW)、平均血小板體積(MPV)、血小板體積分布寬度(PDW)、血小板壓積(PCT)、大血小板比率、白細胞三分群、白細胞五分類、血紅蛋白濃度分布寬度、異常淋巴細胞提示、幼稚細胞提示等各種參數和功能也不斷地添加到一些品牌的儀器上。

              電阻檢測法的基本原理是:在待測液體中置一微孔,在微孔的兩端各加一定電壓的電極,當液體中的顆粒巾進經過微孔時,電極間的電阻就會產生訓瞬間的變化,以因而產生電脈沖,對這種電脈沖進行計數就可得到顆粒的數量,脈沖幅度的大小表示顆粒的體積的大小,經過對各種細胞所產生脈沖的大小的電子的選者擇,可以區分出不同種類的細胞;在液體中加上一定的負壓就能使經過微孔的液體流動。

              隨著電子技術、流式細胞技術、激光技術、電子計算機技術和新熒光化學物質等多種高科技技術在臨床檢驗工作的應用,使血細胞分析儀在自動化程度、先進功能和完美設計方面提高到了一個嶄新的階段,血細胞分析儀已經不僅僅局限在進行常規的血細胞分析,還增加了許多擴展功能,例如將網織紅細胞(RET)的計數和分析功能加入其中,一些儀器還另外增加了幼稚細胞分析和有核紅細胞分析功能,甚至對血液細胞中某些寄生蟲進行提示,更有一些儀器把流式細胞分析儀的某些功能和并到血細胞分析儀上,在進行常規血細胞分析時可得到某些淋巴細胞亞群的分析結果。

              在常規血細胞計數儀上,紅細胞(RBC)、血小板(PLT)共用一個測量通道,血紅蛋白含量(HGB)的測定在任何類型、檔次的儀器中其測試原理都是相同的


              二、下面就各大廠家對白細胞的分類采用的各種不同方法做些介紹

                     1、Coulter公司的VCS聯合檢測技術


                   VCS技術可使白細胞處于與機體完全相同的自然條件下得出檢驗結果。首先在樣本內加入只作用于紅細胞的溶血劑(erythrolya)使紅細胞溶解,然后加入抗溶血劑(stabilyse)起中和溶血劑的作用,使白細胞表面、胞質及細胞大小等特點仍保持與體內相同的狀態,由于不同的細胞在細胞體積、表面特征、內部結構如核漿比例和顆粒構型及質量等方面完全一致的幾率很小,加上儀器配備了先進軟件,可與流式細胞儀一樣調較,設置門限,可在三維圖像上將各細胞較好的分開,達到較準確的分類,同時可提示幼稚白細胞、異型淋巴細胞等。此外,還可將包被了抗CD4CD8單克隆抗體的聚苯乙烯微球加到血液中,使含有相應表面(抗原)標志的淋巴細胞結合相應的微球而改變該細胞的VCS性質,在分析儀上直接計數CD4CD8淋巴細胞,并計算比率。以此原理生產的儀器以GENS細胞分析儀為代表。



              2、Bayer公司的光散射與細胞化學聯合技術

              ADVIA120為代表的此類儀器聯合應用激光散射與過氧化物酶染色技術進行白細胞分類計數。用激光散射技術計數血細胞,因細胞表面結構不同,在不同角度上所測散射光會有所差別。此儀器有四個測量通道:血紅蛋白測量通道、紅細胞/血小板測量通道、嗜堿性粒細胞測量通道、過氧化物酶測量(白細胞分類)通道。其利用五種白細胞過氧化物酶活性的差異對白細胞進行染色,測定其酶反應強度,對白細胞進行分析。在測試過程中,每個細胞產生兩個信號:組化染色結果與光散射結果。它以X軸代表吸光率(組化染色酶反應強度),Y軸代表光散射(細胞大?。?,一起定位于細胞圖上。計算機系統對存儲資料進行分析處理,并結合嗜堿性或分葉細胞通道結果計算出白細胞總數及分類。 

                

              血液中五種白細胞的過氧化物酶活性排列順序為:嗜酸性粒細胞>中性粒細胞>單核細胞。淋巴細胞和嗜堿性粒細胞均無過氧化物酶。將待測血液加入清洗劑和甲醛的等滲液體內經孵育,再加入過氧化氫(H2O2)和四氯-萘酚,細胞內過氧化酶分解產生〔O,使四氯-萘酚顯色并沉淀,并定位于酶反應部位。由于酶反應強度不同,激光束照射細胞在低角度(05°)和高角度(514°)測定散射強度也不同。該儀器采用激光散射法檢測紅細胞和血小板,均需加入試劑;同時還可在紅細胞稀釋液中加入可染RNA的熒光染料,經激光照射激發后,對其中的網織紅細胞進行計數、分類,得到八個網織紅細胞參數。由于其采用化學染色方法來分析細胞類別,故其共使用了11種試劑來進行測試,運行成本較高。



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